微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理,即将含有核酸分子的反应体系分成数万个纳升级的微滴,其中每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后,对每个微滴的荧光信号进行逐一分析,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。
• 真正意义上的绝对定量
– 无需标准曲线;检测下限可低至单拷贝
– 不依赖Ct值,不依赖扩增效率,能克服PCR抑制剂的影响
• 高灵敏度、高特异性检测复杂背景下的靶标序列
– 灵敏度可达0.001%
• 使用灵活,可按实验需要调整通量和灵敏度
– 高通量:一次运行可检测96个样本
– 高灵敏度:合并分析96 孔,一个样本多于140万微滴
• 检测成本低
– <5美金(DNA样本)
肿瘤标志物的早期检测
拷贝数变异
稀有突变检测
二代测序验证
病原微生物检测
绝对定量
相对基因表达分析
无创产前诊断