限制性内切酶

在对载体和DNA进行连接过程中，经常需要先使用限制性内切酶对DNA和载体进行酶切以便于形成可用于连接的末端。

限制性内切酶位点应该选择在插入片段和载体上都有且唯一的位点。做定向克隆时，选择使用两种不同内切酶，酶切位点分别位于插入片段的两端并且是唯一位点。选择不同内切酶时，片段末端可能是平末端也可能是粘性末端。传统克隆通常要用到限制性内切酶。