#

解决方案

在生命科学领域中致力于引进、推广国外先进技术与产品

首页 / 解决方案 / H1N1流感病毒检测整体解决方案

H1N1流感病毒检测整体解决方案

病毒RNA样品提取

Real-time RT-PCR实验的第一步是获得纯净的RNA样品,检测H1N1病毒的呼吸道样本包括支气管肺泡灌洗液、气管抽吸物、痰、鼻咽或口咽洗液或拭子。而在流行病爆发时,能够对大批样品进行快速而安全的提取非常重要。ThermoFisher公司的KingFisher系列自动化磁珠提取纯化仪器,联合Ambion等公司的病毒RNA磁珠提取试剂盒,可以用于从多种来源的样本中,如血清、血浆、口腔拭子和细胞培养液中,提取病毒RNA。该系统不需有机溶剂或RNA沉淀步骤,消除了基于滤膜的方法经常碰到的问题,如滤膜堵塞、大的洗脱体积和不稳定的产率。KingFisher可以让操作人员免去很多繁琐的手工操作,并且远离病毒及有毒试剂的危害。而结合后续的实时定量RT-PCR,可仪检测到低至10拷贝的病毒RNA,可极大提高H1N1亚型猪流感病毒检测的灵敏度。


  此技术经过美国国家兽医服务实验室(NVSL)验证,是美国农业部认可的禽流感检测的分子生物学方法。目前,日本的国立传染病研究所刚刚购买了4台新推出的Kingfisher Flex,应用于流感病毒RNA的纯化。韩国的Catholic University 也刚刚采购了Kingfisher mL用于病毒RNA的应用。越南的Kingfisher安装在世卫组织(WHO)的实验室。中国农业部兽医诊断中心、哈兽研动物流感参考实验室、北京出入境检验检疫局 等单位,以及澳大利亚和新西兰的Kingfisher系统也主要应用于这方面的工作。


Kingfisher磁珠纯化家族

KingFisher FlexKingFisher FlexKingFisher Flex mL
处理体积96:20-1000μl
24:200-5000μl
2415
磁珠回收效率>95%>99%>95%
处理体积96:20-1000μl
24:200-5000μl
2415
磁珠回收效率>95%>99%>95%
处理体积96:20-1000μl
24:200-5000μl
2415
磁珠回收效率>95%>99%>95%


Real-time RT-PCR检测

Real-time RT-PCR是目前最快速最灵敏的病毒检测方法之一,也是《甲型H1N1流感病毒实验室检测方法》中推荐使用的方法。Real-time RT-PCR检测猪流感的方案是用一组寡聚核苷酸引物和Taqman探针,对呼吸道样本或体外培养的猪流感病毒进行检测鉴定。InfA引物和探针为检测出甲型流感病毒而设计,swInfA引物和探针可特异性地检测出所有的猪甲型流感病毒,swH1引物和探针可特异性检测猪流感病毒H1亚型。因为实验材料是RNA,所以推荐使用一步法反转录荧光定量PCR试剂盒。

  美国Bio-Rad作为全球分子生物学实验室设备领域的领先者,对于流行病致病菌和病毒的检测一直非常关注。美国CDC/WHO 关于猪流感检测的文献和操作方法中,使用了Bio-Rad的一步法荧光定量PCR试剂盒iScript One-Step RT-PCR Kit,及Bio-Rad的荧光定量PCR仪。

  美国Bio-Rad的CFX96 实时定量PCR仪,能够为使用者提供可靠的温度控制特性、最先进的光学检测技术和功能强大的软件控制及数据分析能力,能够得到精确的定量结果,准确区分目标基因。为研究者提供最佳的实时定量PCR结果。


《甲型H1N1流感病毒实验室检测方法》中要求样品处理要在生物安全实验室完成。生物安全实验室需要配备相应的生物安全柜对实验室环境、操作人员及样品进行保护。美国热电 Thermo Fisher旗下的 A2/B2型生物安全柜是世界上最好的生物安全柜,在国际上享有很好的盛誉。美国热电的生物安全柜(包括部分棑和全棑)都,达到Class 2等级,工作区气流洁净度达100级。此外,同属Thermo Fisher旗下的Forma系列-80℃超低温冰箱能够为样品提供最好的保存环境与保护,Forma系列液氮罐更可以用于有生物危险性的样品的运输。